許多時候，都需要無菌環(huán)境，無菌培養(yǎng)。例如細胞在體外培養(yǎng)時，為了保證無菌，有時需要加入抗生素。但長期加抗生素對細胞也不利。一些特殊實驗也需要不含抗生素。有沒有一種方法，可提早知道細胞是否有細菌污染呢？

有些客戶采用了德國Minerva Biolabs生產的細菌檢測試劑盒（英文名：Onar® Bacteria Detection Kit，貨號），它是PCR方法，可快速檢測生物樣品（包括細胞培養(yǎng)物和病毒貯存液）中是否存在細菌。該試劑盒引物針對細菌16s rRNA的高保守區(qū),，可檢測超過45種細菌屬。

該試劑盒中的主要試劑均為凍干粉，性能穩(wěn)定。它包含有：

凍干預混液：含引物/核苷酸/內控對照DNA /聚合酶

反應緩沖液

凍干的陽性對照DNA

PCR級水

樣本可以是細胞上清，樣本不用提DNA，但需要熱滅活（95 °C 5分鐘）。

樣本需不含抗生素。如含抗生素，則細胞應在不含抗生素的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)至少一代。

細菌陽性擴增片段450 bp左右，內控對照擴增片段約140bp。

該試劑盒的檢測限為2.4×10的3次方細菌 /ml。

為避免假陽性，建議使用帶濾芯吸頭。

擴增后跑膠觀察條帶，即可判斷結果。示意圖如下：

圖. 內控對照顯示PCR反應正常，樣本中無PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶，提示存在細菌污染。

該產品有2篇引用文獻，如下：

1. Linow M., (2012). Mastermix 16S – Ultra Sensitive Detection of Microbial DNA. Research in Molecular Diagnostics, No. 2/12.

2. Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.

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