細胞膜是一選擇性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜。當(dāng)細胞壞死時，質(zhì)膜不完整，PI就進入細胞內(nèi)部，它可嵌入到DNA或RNA中，使壞死細胞著色，凋亡細胞和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質(zhì)，可跨膜進入活細胞，因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱，它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結(jié)合（主要結(jié)合于A-T）堿基區(qū)），顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。

一、試劑準備

1. 三尖杉酯堿（HT）：300μg/ml；
2. Tris-HCl（pH7.5）：100mmol/L；
3. EDTA緩沖液：5mol/L；

4. 堿性裂解液：0.2mol/L NaOH；
5. 醋酸鈉：3mol/L KAc（pH4.8）；
6. PI母液：500μg/ml；
7. Ho33342母液：2mmol/L；
8. 人早幼粒白血病HL-60細胞：用含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基在37℃，5% CO2條件下培養(yǎng)。
9. 其他：異丙醇、1%SDS、70%乙醇、溴酚藍、蔗糖指示劑、TBE電泳緩沖液、1%瓊脂糖、溴乙錠。

二、三尖杉酯堿誘發(fā)HL-60細胞凋亡

1. 實驗前約24小時，接種兩瓶HL-60細胞，標(biāo)記①、②，每瓶含約6 ml培養(yǎng)液，置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2. 實驗前約2.5小時，當(dāng)細胞密度達到70%，①號瓶加入三尖杉酯堿200 μl，使終濃度為1 μg/ml，②號瓶中加入同等量PBS（pH7.4）作對照。共同放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2.5小時。

3. Ho33342和PI雙重染色鑒別三種細胞

（1）染色：將瓶中的細胞搖勻取200 μl于1.5 ml的離心管中，加入Ho33342母液2 μl，PI 20 μl，染色15分鐘。

（2）滴片：取一載玻片用雙面膠圍成一小室，從離心管中各取以上染色后的細胞懸液10 μl，加入小室內(nèi)蓋上蓋玻片，熒光鏡下用紫外激發(fā)光，高倍鏡下觀察，區(qū)別三種細胞，并注意三者比例。

注意事項

1. 誘導(dǎo)培養(yǎng)HL-60細胞時間要準確；

2. 熒光顯微鏡下觀察細胞時，由于熒光易碎滅，觀察時要盡量快。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴格質(zhì)控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查（細菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應(yīng)等）、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清，應(yīng)認真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物"網(wǎng)站，留言技術(shù)部，得到免費幫助。）

它在國內(nèi)市場經(jīng)歷十幾年，被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇，也是細胞典藏等重大項目十幾年的供應(yīng)品牌